土壤幾丁質酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）試劑盒說明書

更新時間：2025-03-12

瀏覽次數：1035

土壤幾丁質酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細胞壁中，而幾丁質酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。

幾丁質酶水解幾丁質產生N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與對二甲氨基苯甲醛產生紅色化合物，在 585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。

自備儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機、震蕩儀、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿，甲苯、蒸餾水。

新鮮土樣風干，過 30-50 目篩。

			對照管		測定管
	土樣（g）		0.2		0.2
	甲苯（μl）		30		30
	混勻，25℃靜置 15min
	蒸餾水（μl）		200
	試劑一（μl）				200
	混勻，37℃培養 24h
蒸餾水（μl）		400		400
4000rpm，4℃，離心 10min，取上清 300μl 于新的EP 管中
試劑二（μl）		30		30
混勻，沸水浴 5min
試劑三（μl）		900		900
混勻，37℃顯色 20min，取 1ml 于 1ml 玻璃比色皿中，蒸餾水調零，測定 585nm 處吸光值，記為A 對照管和A 測定管，ΔA=A 測定管-A 對照管。

計算公式：

標準曲線：y=5.2714x-0.0007，R²=0.9989；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值ΔA。

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

土壤幾丁質酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000= 598×（ΔA +0.0007） V 反總：反應體系總體積，0.63ml；W：樣本質量，0.2g；T：反應時間，1d；1000：1mg/ml=1000μg/ml

試劑一充分混勻后再使用。